實驗室檢測水中總大腸菌群的三種方法比較分析

　　現(xiàn)在人們對于生活飲用水的水質(zhì)要求逐漸提高，水資源的污染問題也成為關(guān)注焦點。為預防水中微生物對人體健康造成威脅，我國會對生活飲用水進行嚴格的檢驗檢測，其中水中總大腸菌群的檢測是非常重要的一項。

　　飲用水中的總大腸菌群主要是指大腸桿菌、大腸菌群和糞大腸菌群三大類型細菌共同組成的大腸菌群。水中大腸菌群數(shù)的多少，表明水體被糞便污染的程度，并間接表明腸道致病菌存在可能性的大小，因此，總大腸菌群是評價飲用水水質(zhì)的重要指標。目前實驗室常用的水中總大腸菌群檢測方法主要有多管發(fā)酵法、濾膜法、酶底物法等，下面優(yōu)爾普儀器結(jié)合實際工作經(jīng)驗對三種方法進行簡單的分析。

實驗室水中總大腸菌群三種檢測方法比較分析

方法一：濾膜法

　　濾膜法是用孔徑為0.45微米的微孔濾膜過濾水樣，將濾膜貼在添加乳糖的選擇性培養(yǎng)基上，然后在37℃的環(huán)境下培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)基上能形成需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽孢桿菌，計算濾膜上生長的總大腸菌群數(shù)，以100ml水樣中總大腸菌群數(shù)作為報告結(jié)果。

　　濾膜法選擇的檢測培養(yǎng)基一般有m-Endo型培養(yǎng)基和Tergitol-TTC型培養(yǎng)基兩種，前者可在培養(yǎng)基上形成帶有金屬光澤的紅色菌落，后者可形成橙黃色的菌落。

濾膜法優(yōu)點：可定量計數(shù)，無干擾因素下的準確性較高。

濾膜法缺點：對于在處理工程中因為化學和物理因素引起的大腸菌群非致死性損傷，無法在培養(yǎng)基上形成菌落;實驗周期長，通常需要2到3天;特異性不高，結(jié)果易受水樣中其他細菌的影響，假陽性高，需要進一步實驗驗證。

方法二、多管發(fā)酵法

　　多管發(fā)酵法是將水樣進行10倍稀釋，然后分別接種到乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，在35℃的環(huán)境中培養(yǎng)48小時，觀察細菌的生長情況。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美籃瓊脂平板上，進行分離培養(yǎng)，并通過革蘭染色、鏡檢等步驟進行驗證試驗。結(jié)果通過MPN檢索表即可查到100ml水樣中總大腸菌群的可能數(shù)值。

多管發(fā)酵法優(yōu)點：適用于檢測大面積的水樣;實驗方法成本較低;對操作人員專業(yè)素養(yǎng)要求不高，經(jīng)過微生物學基本培訓的技術(shù)人員即可操作;可檢測濁度較大的水樣。

多管發(fā)酵法缺點：若存在非大腸菌群細菌的干擾，無法準確定量;實驗周期較長，通常需要96小時以上;通過MPN表檢索并計算得出大概的實驗結(jié)果，可能造成漏檢，精確性一般。

方法三：酶底物法

　　酶底物法是今年剛寫入國標的水質(zhì)大腸菌群檢測方法，其具體操作步驟如下：

　　用100ml定量瓶量取100ml水樣(若水樣污染嚴重時可進行稀釋)，加入專用的酶底物檢測試劑，蓋上瓶蓋，輕輕搖晃均勻使其溶解。將混合均勻的溶液倒入定量孔板中，然后放進程控定量封口機進行隨機分配和加熱封口。將封過口的定量孔板放在培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)定為36℃，培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)完成后，孔格顯示為黃色即為陽性，無色或顯色明顯淺于陽性色盤的為陰性，計算黃色孔格數(shù)并查詢對照51MPN表或97MPN表，結(jié)果即為100ml水樣中大腸菌群的含量，若水樣進行稀釋，表格結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)即為實驗結(jié)果。

酶底物法100ml水樣定量瓶

酶底物法定量檢測孔板

酶底物法優(yōu)點：檢測范圍大，100ml水樣中可檢出1-2419個目標;可精確檢出100ml水樣中的單個細菌，假陰性低;酶底物試劑可抑制上百萬個異養(yǎng)細菌，假陽性低;準確性高，無需驗證實驗;實驗周期短，時間不超過24小時;操作簡單，培訓一次就能輕松使用;適用于大量樣品的批量快速檢測。

酶底物法缺點：需要購買程控定量封口機和酶底物試劑，相對來說成本稍微高一些。

　　以上就是對濾膜法、多管發(fā)酵法、酶底物法檢測水中總大腸菌群的簡單介紹和比較分析，從中可以看出的是，酶底物法作為國標中新推出的檢測方法，有著較多的優(yōu)勢，除了能滿足基本的實驗要求外，也減少了實驗時間，能應對突發(fā)的事件，彌補了早前兩種方法的不足，這里優(yōu)爾普儀器建議有條件的實驗室配置使用。